Kuidas kasutada geenipüstoli

1. Materjali ettevalmistamine

9 cm2 kultuuri tassile pandi õhuke kiht keskkonda ja materjal (tavaliselt ebaküpsed embrüod, küpsed embrüod, väikesed kallused, suspensioonirakud, protoplastid jne) plaaditi tassi keskele 3 cm läbimõõduga. .

2, kulla pulbri töötlemine

Võtke 60mg kuldpulbrit või volframipulbrit tsentrifuugikambris, lisage 1 ml absoluutset etanooli, loksutage hoolikalt 3 minutit, tsentrifuugige 1 ui 9615 g juures, eemaldage supernatant, lisage 1 ml steriilset vett ja segage hästi, tsentrifuugige 9615g juures, korrake ülaltoodud punkti 3. Ajad. Lõpuks suspendeeriti kuldne pulber 1 ml steriilses destilleeritud vees ja hoiti 4 ° C juures või toatemperatuuril.

3, DNA töötlemine

Võtke 50tA kuldpulbri suspensiooni, lisage 5-l plasmiidse DNA (1,0 / lg 1) lahus, 50 l

0,1 mol / l spermidiini (kasutatav lahus steriliseeriti steriilselt), loksutati 3 minutit, jäeti toatemperatuurile 10 minutiks, tsentrifuugiti 9615 g juures 10 sekundit, visatakse supernatant ära; lisage 250 ~ 1 absoluutset etanooli, loksutage tsentrifuugimist 9615 g juures 10 sekundit ja visake supernatant ära. Pellet resuspendeeriti 60/1 1 absoluutses etanoolis ja kasutati 5 kaadrit (10 kuni 1 iga võtte kohta).

4, geenipüstoli toimimist

Kõik geenipüstoli toimingud viiakse läbi aseptilistes tingimustes:

1) Desinfitseerige geenipüstoli ja proovikambri pind 70% etanooliga. Samal ajal leotati barjäärivõrk ja lõhustuv ketas, mikroelastne kandur, selle hoidik ja kinnitusvahend 15 minutit 70% etanooliga ja seejärel pandi puhtale põrandale kuivaks. Lõhustuvat diafragmat, fikseeritud katet ja mikroelastset kandeseadet saab steriliseerida 70% etanooliga ja kuivatada.

2) Sisestage mikropartikkel liugurisse ja lisage DNA ja kulla pulbri segu mikroosakeste keskele ja kuivatage umbes 1 min.

3) Paigaldage purunev membraan oma hoidikusse ja keerake seda päripäeva gaasikiirendisse.

4) Paigaldage ruumirõngas, blokeeriv võrk, blokeeriv võrgupesa, osakeste kandja ja kinnitusrõngas (nägu koos osakestega allapoole), pingutage kate ja sisestage see haaratsisse.

5) Asetage proov pommitamiskambrisse ja sulgege uks.

6) Avage heeliumi silindri peaventiil ja keerake heeliumi regulaatori klappi päripäeva nii, et manomeetri osuti näit oleks kõrgem kui diafragma rõhk 200Psi (= 1.379MPa).

7) Lülitage sisse geenipüstol ja trafo lüliti.

8) Vajutage vaakumnuppu. Kui vaakum on 26-28 Hg (= 88,05 ～ 94,82 kPa), vajutage kiiresti nuppu Hoidke, seejärel vajutage ja hoidke käivitusnuppu all ja hoidke seda all, kuni see aktiveerub.

9) Vajutage ventilaatori klahvi proovi lähtestamiseks pärast vaakumtabeli nullimist.

10) Sulgege.

Pingutage heeliumi silindri pealülitit, vajutage tühi püstol, tagastage manomeetri osuti nullini, seejärel pöörake manomeetri reguleerimisklappi vastupäeva; lülitage välja geenipüstoli ja transformaatori lüliti pealüliti.